Времяразрешенный конфокальный флуоресцентный микроскоп PicoQuant MicroTime 200 STED
Времяразрешенный конфокальный флуоресцентный микроскоп с приставкой для флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения.
- Интегрированная конфокальная система с функцией STED на базе инвертированного микроскопа;
- Разрешение ниже 50 нм;
- Возбуждение на 640 нм и опционально на 595 нм и 660 нм с дополнительными лазерами;
- До 6 истинно параллельных каналов детекции с использованием детекторов SPAD и гибридных ФЭУ;
- Поддерживает режимы gated STED (gSTED) и gSTED-FCS;
- Пьезо-сканер для 2D- и 3D-(lifetime) имиджинга и точного позиционирования;
- Продвинутое ПО для съемки и анализа SymPhoTime 64;
- Уникальные опции для одновременной съемки в режимах АСМ/FLIM/STED;
- Поддерживает все другие методы, доступные на MicroTime 200, в частности, FLIM, FCS, FCCS, FLCS, FRET и т.д.;
- Новый гальвосканер FLIMbee, сочетающий высокую скорость (возможности rapidFLIM) и точность позиционирования.
Область применения: изучение оптических свойств одиночных атомов, молекул и наночастиц на подложках и в средах. Приложения в физике, химии, биологии, медицине, генно-инженерных технологиях, нанобезопасности и экологии:
- Спектроскопия единичных молекул;
- Времяразрешенная флуоресценция;
- Картирование по временам жизни флуоресценции/фосфоресценции (fluorescence/phosphorescence lifetime imaging, FLIM/PLIM);
- Флуоресцентная корреляционная спектроскопия (Fluorescence Correlation Spectroscopy, FCS);
- Флуоресцентная корреляционная времяразрешенная спектроскопия (Fluorescence Lifetime Correlation Spectroscopy, FLCS);
- Резонансный перенос энергии по Фёрстеру (Foerster Resonance Energy Transfer, FRET);
- Двухфокусная флуоресцентная корреляционная спектроскопия (Dual-focus Fluorescence Correlation Spectroscopy, 2fFCS);
- Импульсное переменное возбуждение (Pulsed Interleaved Excitation (PIE);
- Анизотропия/поляризация флуоресценции;
- Анализ паттернов (pattern matching analysis);
- Времяразрешенная фотолюминесценция (TRPL);
- Картирование в режиме времяразрешенной фотолюминесценции;
- Antibunching.
Система возбуждения:
- Пикосекундные диодные лазеры (375 нм — 900 нм) с частотой повторов до 80 МГц внутри компактного блока лазеров;
- Одно- или многоканальный лазерный драйвер;
- Опционально: возбуждение до 266 нм;
- Опционально: внешний лазер (например, титан — сапфировый лазер).
Микроскоп:
- Инвертированный микроскоп Olympus IX 73 или IX 83;
- Правый порт специальной конструкции для конфокальной микроскопии;
- Свободные левый порт и порт на задней панели (например, для широкопольной визуализации или TIRF);
- Предусмотрен блок проходящего света;
- Специальный столик для ручного позиционирования образца с диапазоном 25 мм;
- Стандартный держатель образца для покровных стекол 20 мм x 20 мм;
- Опционально: эпифлуоресцентное освещение, опционально: криостат для низкотемпературных измерений;
- Опционально: комбинация с атомным силовым микроскопом (АСМ).
Объективы:
- Безиммерсионные объективы с увеличением 20x и 40x (стандартные);
- Различные высокотехнологичные объективы (масляно-водяная иммерсия, с воздушным зазором, улучшенные для ИК/УФ, TIRF, или длиннофокусные объективы).
Детекторы:
- Однофотонные лавинные диоды (серия PDM, τ-SPAD);
- Фотоумножительные электронные устройства (серия PMA), гибридные фотоумножители (серия PMA Hybrid).
Сбор данных:
- На основе метода подсчета единичных фотонов с временным коррелированием (TCSPC) в уникальном режиме с временной привязкой и временным разрешением (TTTR);
- Одновременный сбор данных по каналам детектирования в количестве до 4 штук.
Сканирование:
- Управляемое компьютером 2-мерное сканирование пьезо-объективом с диапазоном сканирования 80 мкм x 80 мкм с точностью позиционирования 1 нм;
- PIFOC для 3-мерной визуализации, диапазон 80 мкм при номинальной точности позиционирования 1 нм;
- Опционально: сканирование образца;
- Опционально: столик сканирования большой площади с сантиметровым диапазоном.
Главный оптический блок:
- Конфокальная установка детектирования в компактном корпусе с количеством параллельных каналов детектирования до 4 штук;
- Специализированное высокотехнологичное дихроичное устройство с повышенной стабильностью;
- Все оптические элементы являются легко доступными, регулируемыми и заменяемыми;
- Камера CCD для диагностики пучка и фотодиод для измерений относительной мощности;
- Настраиваемые делители пучка и выходные порты для подключения внешних устройств.
Программное обеспечение:
- Простое в использовании и комплексное программное обеспечение для получения и анализа данных на базе Windows;
- 1-, 2-, и 3-мерный сбор данных на основе универсального формата фалов TTTR;
- Архивирование данных в рабочем пространстве, временной селектор для всех методов, функции экспорта данных, биннинг, подбор TCSPC (многоэкспоненциальное затухание (от 1 до 5 экспонент), подбор методом наименьших квадратов, подбор MLE, деконволюция IRF, подбор хвоста, анализ ошибок методом бутстрэп);
- Анализ точечного измерения: Подбор FCS, FCCS, FLCS, PIE-FCS, FCS (модели: диффузионные константы, триплетное состояние, конформационная, протонирование, функция рассеянной точки по Гауссу, анализ ошибок методом бутстрэп), калибровка FCS, корреляция антигруппировки/ совпадения, общая корреляция, мерцание (построение гистограмм для режимов вкл/выкл), гистограмма скорости импульсов (PCH), TCSPC с управляемой интенсивностью, отслеживание изменений времени жизни флуоресценции и интенсивности, гистограмма времени жизни, BIFL (комплексный анализ серии импульсов);
- Анализ изображений: FLIM, FLIM-FRET, FRET интенсивности, визуализация анизотропии, визуализация интенсивности флуоресценции (с временной синхронизацией), сопоставление изображений, область исследования (ROI);
- Язык написания сценариев («STUPSLANG») для пользовательских алгоритмов анализа, фиттинга и компонентов графического интерфейса.
В последние годы флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения уделяется все больше и больше внимания. В 2014 году за разработку метода была вручена Нобелевская премия по химии. Его очевидным преимуществом является возможность изучать биологические системы, ранее недоступные для оптических методов из-за дифракционного предела. Одна из наиболее популярных техник микроскопии сверхвысокого разрешения — Stimulated Emission Depletion (STED) microscopy.
Съемка в режиме STED может быть осуществлена с использованием конфокального микроскопа, поэтому стала отличным дополнением системы Microtime 200. При этом нет необходимости в длительной настройке микроскопа для перехода в режим STED.
- Silver-coated nanoporous gold skeletons for fluorescence amplification
Lee M.-J., Yang W.-G., Kim J.H., Hwang K., Chae W.-S. Microporous and Mesoporous Materials, Vol.237, p.60-64 (2017).
Reference to: MicroTime 200, SymPhoTime. Related to: FLIM. - Improving analytical methods for protein-protein interaction through implementation of chemically inducible dimerization
Andersen T.G., Nintemann S.J., Marek M., Halkier B.A., Schulz A., Burow M. Scientific Reports, Vol.006, 27766 (2016).
Reference to: MicroTime 200, LSM Upgrade Kit, SymPhoTime. Related to: FLIM, FRET. - Influence of plasmonic array geometry on energy transfer from a quantum well to a quantum dot layer
Higgins L.J., Morocico C.A., Karanikolas V.D., Bell A.P., Gough J.J., Murphy G.P., Parbrook P.J., Bradley A.L. Nanoscale, Vol.008, p.18170-18179 (2016).
Reference to: MicroTime 200. Related to: FRET, TRPL. - Temperature-dependent luminescent decay properties of CdTe quantum dot monolayers: impact of concentration on carrier trapping
Murphy G.P., Zhang X., Bradley A.L. The Journal of Physical Chemistry C, Vol.120, p. 26490–26497 (2016).
Reference to: MicroTime 200. Related to: FLIM, TRPL. - Ag colloids and arrays for plasmonic non-radiative energy transfer from quantum dots to a quantum well
Murphy G.P., Gough J.J., Higgins L.J., Karanikolas V.D., Wilson K.M., Garcia Coindreau J.A., Zubialevich V.Z., Parbrook P.J., Bradley A.L. Optics (2016).
Reference to: MicroTime 200. Related to: FLIM, TRPL. - Molecular organization, localization and orientation of antifungal antibiotic amphotericin B in a single lipid bilayer
Grudzinski W., Sagan J., Welc R., Luchowski R., Gruszecki W.I. Scientific Reports, Vol.006, 32780 (2016).
Reference to: MicroTime 200, FluoTime 300. Related to: FLIM, Anisotropy. - Spatial inhomogeneity in spectra and exciton dynamics in porphyrin micro-rods and micro-brushes: Confocal microscopy
Chattoraj S., Bhattacharyya K. Journal of Chemical Sciences, Vol.128, p.1717-1724 (2016).
Reference to: MicroTime 200. Related to: FLIM. - Exploring the HYDRAtion method for loading siRNA on liposomes: the interplay between stability and biological activity in human undiluted ascites fluid
Dakwar G.R., Braeckmans K., Ceelen W., De Smedt S.C., Remaut K. Drug Delivery and Translational Research, Vol.007, p.241-251 (2016).
Reference to: LSM Upgrade Kit, SymPhoTime. Related to: FCS. - Determination of equilibrium and rate constants for complex formation by fluorescence correlation spectroscopy supplemented by dynamic light scattering and Taylor dispersion analysis
Zhang X., Poniewierski A., Jelińska A., Zagożdżon A., Wisniewska A., Hou S., Hołyst R. Soft Matter, Vol.012, p.8186-8194 (2016).
Reference to: PicoHarp 300, LSM Upgrade Kit, SymPhoTime. Related to: FCS. - Functional role of T-cell receptor nanoclusters in signal initiation and antigen discrimination
Pageon S.V., Tabarin T., Yamamoto Y., Ma Y., Nicovich P.R., Bridgeman J.S., Cohnen A., Benzing C., Gao Y., Crowther M.D., Tungatt K., Dolton G., Sewell A.K., Price D.A., Acuto O., Parton R.G., Gooding J.J., Rossy J,. Rossjohn J., Gaus K. PNAS, Vol.1113, p.5454-5463 (2016).
Reference to: MicroTime 200. Related to: FCS.
- Подробная брошюра MicroTime 200 на русском языке;
- Описание метода rapidFLIM;
- Времяразрешенная флуоресцентная микроскопия. Краткое описание методик;
- Принцип коррелированного во времени счета единичных фотонов;
- Основные принципы PLIM;
- Использование спектрографа Andor Technology с Microtime 200;
- Использование АСМ Bruker с Microtime 200;
- Особенности FLIM при двухфотонном возбуждении;
- Приложения FLIM;
- Измерения молекулярных расстояний с помощью FRET.