Мультифункциональный анализатор стабильности белков PSA-16
Многофункциональный анализатор стабильности белков методом nanoDSF.
Прибор не требует предварительного нагрева, очистки и обслуживания. Система интегрирована с управляющим компьютером для сбора и анализа данных. Пробирки для образцов из высокочистого кварца с высоким УФ-пропусканием позволяют работать с образцами низкой концентрации и не требуют предварительной обработки. Конструкция пробирок в формате стрипов по 8 полосок обеспечивает гибкость при загрузке образцов. Пробирки имеют герметичную конструкцию, предотвращающую испарение образца во время эксперимента.
Принцип метода nanoDSF:
- При возбуждении на 280 нм белок испускает флуоресценцию, обусловленную эмиссией триптофана.
- Спектр флуоресценции триптофана тесно связан с его микроокружением.
- В свернутом состоянии триптофан находится в гидрофобном ядре белка. После разворачивания белка триптофан оказывается в растворителе.
- В процессе разворачивания пик эмиссии триптофана смещается с 330 нм на 350 нм.
- Измеряемые параметры: Tm, Ton, Cm, ΔG.
- Изменение соотношения между значениями флуоресценции при 350 нм и 330 нм может быть использовано для мониторинга процесса разворачивания белка.
- Возможна работа в агрессивных средах, например можно проводить измерения мембранных белков в детергентной среде.
- Скрининг буферов
- Скрининг детергентов
- Контроль качества белков
- Контроль условий хранения
- Модификация белков
- Анализ термического сдвига
- Идентификация серотипа AAVS
- Сравнение производственных партий
- Изотермическая стабильность
- Рефолдинг белков
| Технические характеристики | |
| Измерение | Тм, Тон, См,ΔG, Изотермическая стабильность, Термическая стабильность |
| Пропускная способность | 16 образцов/прогон |
| Время тестирования | 10～60 мин |
| Объем пробы | ≤20 мкл |
| Концентрация | 0,05 мг/мл～300 мг/мл |
| Сбор данных | 20 точек данных на образец за 1 минуту (быстрое индивидуальное сканирование, со сбором данных каждые 3 секунды). |
| Точность | Значение Tm CV＜1% Tm value CV＜1% |
| Диапазон температур | 15 — 110℃ |
| Точность температуры | ±0,2℃ |
| Скорость нагрева | 0,1 — 15℃/минута, регулируемая |
| Длина волны | 330±5 нм и 350±5 нм |
NanoDSF (нано-дифференциальная сканирующая флуориметрия) — это быстрый, надежный, высококачественный метод, не требующий флуоресцентных меток и растворов для анализа стабильности белка, термической денатурации белка и анализа температуры плавления на основе автофлуоресценции триптофана. NanoDSF является отличным инструментом для скрининга буферов и детергентов, а также позволяет анализировать коллоидную стабильность растворов белков.
В целом, автофлуоресценция триптофана сильно зависит от их 3D-структуры белка и, следовательно, от локального окружения аминокислотных остатков. При использовании химических детергентов или высокой температуры белки могут разворачиваться, что приводит к изменениям спектра автофлуоресценции триптофана. NanoDSF отслеживает эти изменения с высоким временным разрешением и может выявить даже несколько конформационных переходов. Поэтому NanoDSF весьма эффективен при разработке антител, изучении мембранных белков, контроле качества белка, скрининге буфера, анализе разворачивания белка и скрининге связывания низкомолекулярных соединений.
Рисунок 1. Принцип, лежащий в основе термической денатурации белка: повышение температуры вызывает денатурацию третичной структуры белка и, таким образом, остатки триптофана, подвергаются воздействию растворителя. NanoDSF отслеживает параллельные изменения флуоресценции триптофана на длинах волн 330 и 350 нм.
Конформационная стабильность белка описывается его средней температурой денатурации Tm (°C), которая является точкой, где разворачивается половина белка. Метод nanoDSF основан на детекции автофлуоресценции триптофана (и в меньшей степени тирозина), которая очень чувствительна и изменяется при термическом разворачивании.
Производятся измерения флуоресценции на длинах волн 330/350 нм. Температуры плавления регистрируются путем мониторинга изменений автофлуоресценции триптофана. Важно отметить, что дополнительного окрашивания образов не требуется, буфер может быть любым.